一、服務簡介
細胞周期(Cell Cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程,細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細胞在分裂結束后暫時離開細胞周期,停止細胞分裂,執行一定生物學功能(G0期)。 流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中,在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出,形成細胞柱。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測,得到該細胞的光散射和熒光指標,分析出其體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學特征。
細胞內的DNA含量隨細胞周期進程發生周期性變化,如G0/G1期的DNA含量為2C,而G2期的DNA含量是4C。利用PI標記的方法,通過流式細胞儀對細胞內DNA的相對含量進行測定,可分析細胞周期各時相的百分比。
二、技術流程 1、取對數生長期細胞,倒去培養液,胰酶適度消化細胞,用培養液吹打,800 rpm,離心 15 min去上清。
2、PBS洗2次,加0.5 mL PBS吹勻,務必吹散。
3、用5 mL注射器將細胞吸起,用力打入5 mL 70%(預冷)乙醇中,封口膜封口。4℃固定過夜(可長至2周)。
4、800 rpm 15 min收集固定細胞,PBS洗2次。
5、用0.4 mL PBS重懸細胞并轉至Tube中輕輕吹打(防止細胞破碎)。
6、加RNase-A約3 μL至終濃度約為50 μg/mL ,37℃水浴消化30 min;
七、加PI約50 μL至終濃度約為65 μg/mL ,在冰浴中避光染色30 min。
八、用300目(孔徑40~50微米)尼龍網過濾,上機檢測。
九、樣品分析測定及打印。
三、服務說明 1、 客戶提供:狀態良好的受試細胞;
2、實驗周期:1-2周;
3、明確檢測時間
4、提供流式原文件
四、成果展示
五、詢價及訂購
感謝您選擇我公司的流式檢測細胞周期服務。如有相關問題請聯系我們的工作人員。